土壤脲酶(S-UE)活性检测试剂盒
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土壤脲酶(S-UE)活性检测试剂盒
HYYSB7391
可见分光光度法
产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系华越洋工作人员。
试剂名称
规格
保存条件
试剂一
自备试剂
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试剂二
粉剂x2 瓶
2-8℃保存
试剂三
液体 65 mLx1 瓶
2-8℃保存
试剂四A液
液体 2mLx1 瓶
2-8℃保存
试剂四B液
液体8mLx1瓶
2-8℃保存
试剂五
液体 0.5 mLx1 瓶
2-8℃保存
标准品
液体1mLx1支
2-8℃保存
土壤脲酶(S-UE)活性检测试剂盒
溶液的配制:
1、试剂一:自备甲苯，大约需要 10mL，常温保存;试剂盒内提供一个 30mL 棕色空瓶，仅做分装使用，请自行标注试剂名称;
2、试剂二:临用前取1瓶加入 10mL蒸馏水，充分溶解待用，用不完的试剂 2-8℃保存4周:
3、试剂四:临用前将A液和B液按体积比1:4混合待用:用多少配多少;
4、试剂五:液体置于试剂瓶内 EP管中，使用前需先离心。临用前加入9.5mL蒸馏水，混匀，待用:用不完的试剂 2-8℃保存2周:
5、标准品:1mg/mL氮标准液。
土壤脲酶(S-UE)活性检测试剂盒
产品说明:
S-UE 能够水解尿素，产生氨和碳酸。土壤脲酶活性与土壤的微生物数量、有机物质含量、全氮和速效氨含量呈正相关。土壤脲酶活性反应了土壤的氮素状况。
本法以尿素为基质,利用靛酚蓝比色法测定脲酶水解尿素产生的NH3-N,生成的蓝色靛酚和氨的浓度成正比。
注意:实验之前建议选择 2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计、水浴锅/恒温培养箱、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、30-50 目筛、研钵、冰、甲苯(>98%,AR)和蒸馏水。
土壤脲酶(S-UE)活性检测试剂盒
操作步骤:
样本处理(可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献)
新鲜土样自然风干或 37℃烘箱风干，过30-50 目筛。
测定步骤
分光光度计预热 30min 以上，调节波长至630nm，蒸馏水调零。
标准品的准备:吸取适量的标准溶液，用蒸馏水稀释至8、6、4、2、1、0.5、0.25、0(空白管)ug/mL。可参考下表。
序号
稀释前浓度(ug/mL)
标准液体积
(uL)
蒸馏水体积(uL)
稀释后浓度(ug/mL)
1
1000
20
1980
10
2
10
800
200
8
3
10
600
400
6
4
10
400
600
4
5
4
500
500
2
6
2
500
500
1
7
1
500
500
0.5
8
0.5
500
500
0.25
9
-
0
500
0
备注:下述实验中每个标准管需360uL标准液(注意不要在此步骤直接检测标准溶液吸光度)。
- 土样酶促反应
试剂名称
测定管
对照管
风干土样(g)
0.25
0.25
试剂一(uL)
125
125
振荡混匀，使土样全部湿润，室温放置 15min
试剂二(uL)
625
-
蒸馏水(uL)
-
625
试剂三(uL)
1250
1250
混匀，放入37℃水浴或恒温培养箱培养24h后，10000g常温离心10min，取上清液。将酶促反应结束的上清液稀释10倍(取 0.1mL上清液，加入0.9mL蒸馏水)进行步骤 5，若最终计算得到的 ΔA 仍大于1则继续稀释。
- 测氨量
试剂名称
测定管
对照管
标准管
稀释后的上清液或标准品(uL)
360
360
360
试剂四(uL)
120
120
120
试剂五(uL)
120
120
120
充分混匀，室温放置 20min
蒸馏水(uL)
400
400
400
充分混匀，630nm 处蒸馏水调零，测吸光值A，分别记为A测定管、A对照管、A标准管、A空白管。计算 ΔA测定=A 测定管-A对照管，ΔA 标准=A 标准管-A空白管，每个测定管设一个对照管。标准曲线和空白管只需测 1-2次。
土壤脲酶(S-UE)活性检测试剂盒
三、S-UE 活力的计算
1、标曲绘制
标准曲线的建立:根据标准管的浓度(x，ug/mL)和吸光度ΔA标准(y，ΔA标准)，建立标准曲线。根据标准曲线，将 ΔA测定(y，ΔA测定)带入公式计算样本浓度(x，ug/mL)。
2、S-UE活力计算
单位的定义:每天每g土样中产生 1ug NH3-N 定义为一个酶活力单位。
S-UE活力(U/g 土样)=X×10×V 反总÷W÷T=80×X
10:稀释倍数:T:反应时间，1d:V反总:反应体系总体积:2mL:W:样本质量，0.25g
