土壤酸性磷酸酶(S-ACP)活性检测试剂盒

土壤酸性磷酸酶(S-ACP)活性检测试剂盒

HYYSB5291

可见分光光度法

规格型号：50T/48S

产品内容：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系华越洋工作人员。

土壤酸性磷酸酶(S-ACP)活性检测试剂盒

溶液的配制:

1、试剂二:用前加 50 mL 蒸馏水充分溶解，4℃保存8周:

2、试剂四:临用前取1瓶加576uL无水乙醇(自备)。24uL蒸馏水充分溶解，用不完的试剂可以 4℃保存2周(变褐色后不能再使用):

3、标准品:0.5 mmolmL 苯酚标准液。

产品说明:

土壤磷酸酶是一类催化土壤有机磷矿化的酶，其活性的高低直接影响着土壤中有机磷的分解转化及其生物有效性，是评价土壤磷素生物转化方向与强度的指标。土寰磷酸酶受到土壤碳、氮含量、有效磷含量和pH 显著影响，根据最适 pH范围，通常分为酸性、中性和碱性三种类型。酸性环境中，S-ACP催化磷酸苯二钠水解生成苯酚和磷酸氢二钠,通过测定酚的生成量即可计算出 S-ACP 活性。

注意:实验之前建议选择 2-3个预期差异大的样本做预实验。

需自备的仪器和用品:

可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、台式离心机、水浴锅/恒温培养箱、分析天平、研钵、可调式移液器、冰、蒸馏水、30-50目筛、乙醇(>98%，AR)和甲苯(>98%，AR)。

土壤酸性磷酸酶(S-ACP)活性检测试剂盒

操作步骤:

一、样本处理(可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献)

1.新鲜土样自然风干或 37℃烘箱风干，过 30~50 目筛。

2.称取风干混匀土壤约 0.1g，加入0.05mL甲苯(自备)，轻摇15min;加0.4mL试剂一并且摇匀后，置于37℃水浴锅/恒温培养箱，开始计时，催化反应 24h;到时间后迅速加入1mL 试

剂二充分混匀，以终止酶催化的反。8000rpm，25°C离心10min，取上清液置于冰上待测。土壤酸性磷酸酶(S-ACP)活性检测试剂盒

二、测定步骤

可见分光光度计预热30min以上，调节波长到660nm，蒸馏水调零。

2. 空白管:取1mL玻璃比色皿，加入 50uL试剂一，200uL 试剂三，20uL 试剂四，充分混匀，显色后再加蒸馏水 730uL，混匀后室温静置 30min，于660nm 测定吸光度，记为A空白管。空白管只需做 1-2次。
3. 标准管:取 1mL 玻璃比色皿，加入 50uL 标准液，200uL, 试剂三，20uL 试剂四，充分混匀，显色后再加蒸馆水 730uL，混匀后室温静置 30min，于660nm测定吸光度，记为A标准管。标准管只需做1-2次。
4. 测定管:取1mL玻璃比色皿，加入50uL上清液，200uL试剂三，20uL试剂四，充分混匀，显色后再加蒸馏水 730uL，混匀后室温静置 30min，于660nm测定吸光度，记为A测定管。注意:空白管和标准管只需测定 1-2次。

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三、S-ACP 活性计算

活性单位定义:37℃中每克土壤每天释放Inmol酚为1个酶活单位。

19. ACP 活性(U/g 土样)=[C 标准液x(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管)]xV总x1000÷W÷T=725x(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管)÷W

C标准液:0.5umol/mL;V总:催化体系总体积，1.45mL;W:土壤样本质量，g;T:催化反应时间，24h=ld;1000:单位换算系数，Iumol=1000nmol。