酵母AXT3K感受态细胞
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酵母AXT3K感受态细胞（化转）
AXT3K Chemically Competent Cell
酵母AXT3K感受态细胞产品说明：
AXT3K 酿酒酵母菌株为 Na+ /钠离子缺陷型菌株(ena1, nha1, and nhx1 of yeast disrupted)，其缺失了内源 的质膜 Na+ 逆向转运蛋白 NHX1 以及 Na+ 外排蛋白 NHA1 和 ENA1-4，丧失了转运 Na+ 的能力。AXT3K 多 用于 Na+ 转运蛋白的鉴定试验中，也可用于 Na+ 通道或钠钾离子泵的鉴定。该菌株对 Na+ 特别敏感，在含有 40 mM NaCl 的培养基上生长，其生长受到明显抑制。
产品储存：-80℃保存，6 个月有效。
酵母AXT3K感受态细胞产品组成： cat:HYYKB08-1ml
产品组成
规格
温度
AXT3K Competent Cell
10×100 μL/支
-80℃（6 个月）
Carrier DNA (10 μg/μL)
100 μL
-20℃（24 个月）
PEG/LiAC
5 mL
4℃（24 个月）
酵母AXT3K感受态细胞基因型：
MATα his3-11 leu2-112 trp1-1 ade2-1 ura3-1 ena1△::his3::ena4△ nha1△::leu2 nhx1△::trp1 in W303-1B
产品说明：
AXT3K 酿酒酵母菌株为 Na+/钠离子缺陷型菌株(ena1, nha1, and nhx1 of yeast disrupted)，其缺失了内源 的质膜 Na+逆向转运蛋白 NHX1 以及 Na+外排蛋白 NHA1 和 ENA1-4，丧失了转运 Na+ 的能力。AXT3K 多 用于 Na+转运蛋白的鉴定试验中，也可用于 Na+通道或钠钾离子泵的鉴定。该菌株对 Na+特别敏感，在含有 40 mM NaCl 的培养基上生长，其生长受到明显抑制。
酵母AXT3K感受态细胞使用方法：
1. 取感受态细胞 100 µL 于冰上融化的，依次加入预冷的目的质粒 2-5 µg，Carrier DNA (95-100 ℃ , 5 min， 快速冰浴，重复一次) 10 µL ，PEG/LiAc 500 µL 并吸打几次混匀，30 ℃水浴 30 min (15 min 时翻转 6-8 次 混匀)。
2. 将管放 42 ℃水浴 15 min (7.5 min 时翻转 6-8 次混匀)。
3. 10,000 rpm 离心 30 s 弃上清，ddH2O 400 µL 重悬，离心 30 s 弃上清。
4. ddH2O 50 µL 重悬，涂板，29 ℃培养 48-96 h。
酵母AXT3K感受态细胞注意事项：
1. 感受态细胞最好在冰上融化。
2. 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量.
3. 同时转化 2-3 种质粒时可增加质粒的用量。
4. AXT3K 酵母菌株对高温敏感，最适生长温度为 27-30 ℃;高于 31 ℃ , 生长速度和转化效率呈指数下降。
5. 菌落变粉不是污染，是酵母细胞生长中一个常见现象。当细胞在平板培养几天后， 平板上的 Adenine 被 酵母消耗完毕，酵母试图通过自身代谢途径合成 Adenine 以供利用，然而，有些菌株的 ADE2 基因被破坏， Adenine 合成途径受阻；又由于其 ADE4,5,6,7,8 基因均正常，所以造成中间产物 P-ribosylamino imidazole (AIR)在细胞中积累而使菌落变为粉红色。
6. 酵母在缺陷培养基中生长速度比 YPDA 培养基慢，培养基中缺陷成分越多，生长越慢，以转化涂板为 例：涂 YPDA 平板 29 ℃ , 48 h 培养可见直径 1 mm 克隆；涂 SD 单缺平板 29℃ , 48-60 h 培养可见直径 1 mm 克隆，涂 SD 双缺平板 29℃ , 60-80 h 培养可见直径 1 mm 克隆，涂 SD 三缺或四缺平板平板 29 ℃ , 80-90 h 培养可见直径 1 mm 克隆。
