蛋白浓缩试剂盒
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蛋白浓缩试剂盒
蛋白浓缩试剂盒产品内容:
产品名称 规格型号 保存条件
试剂A-沉淀溶液 10ml RT
试剂 C-助沉剂 5ml RT
试剂D-中和液 250ul RT
1 M NaCl 1ml RT
1×SDS-PAGE
蛋白上样缓冲液
(变性，还原) 1ml -20℃
蛋白浓缩试剂盒储存条件和效期:试剂盒常温运输:收到后，按照标签温度贮存:本试剂盒有效期1年。
产品简介:
试剂盒原理:在酸性条件下蛋白质形成不溶性盐，使蛋白质变性导致构象发生改变，蛋白暴露出较多的疏水性基团，蛋白发生聚集而沉淀。为了避免酸对后续电泳的影响，沉淀的蛋白要使用丙酮等洗涤液彻底清洗去除酸。浓缩后的蛋白可以用于SDS-PAGE和Western blot前的蛋白样品处理。
以每次浓缩800μl蛋白样品计算，本试剂盒可以使用40-45次。
蛋白浓缩试剂盒操作方法:
1.准备 1.5ml干净的离心管，加入800μl蛋白样品溶液。
可选:如果样品溶液中离子强度低于10mM，补加8μl 的1M NaCI溶液。低于800 μl的样品，加入8μl 1M NaCl，用水补齐体积至800μl，使NaCl终浓度为10mM。
2.加入蛋白溶液1/10体积的试剂C-助沉剂-80μl，混匀，常温静置15分钟。
注:加入试剂C后溶液变浑浊。
3. 加入步骤2溶液1/4体积的试剂A-220μl，涡旋震荡10-30秒，使之充分混匀。
4.冰浴放置15分钟。
5.4℃，12000 rpm(13000g)离心10分钟。注:离心后白色蛋白沉淀弥散性可见于离心管管壁上。
6.小心去掉上清液，保留沉淀。
注:请小心操作，可以用移液器辅助彻底吸弃上清。
7. 沉淀中加入600μl预冷的丙酮(自备，试剂盒不提供)，涡旋震荡10-30秒，彻底混匀。
注:丙酮有刺激性气味，请在通风橱内操作。
- 冰浴 15分钟。
9.4℃，12000 rpm(13000g)离心 10 分钟;在通风橱中，倒掉上清。残留上清用 10μl 吸头彻底吸弃，沉淀物通风晾干 30-60 秒。注:沉淀不能过分干燥，否则将导致蛋白不好溶解。
10.蛋白溶解:
根据下表选择溶解缓冲液:
下游实验
溶解缓冲液
备注
SDS-PAGE 电泳
1×SDS-PAGE 蛋白上样缓冲液(变性，还原)
试剂盒提供
加入溶解缓冲液后，彻底溶解沉淀(37℃温浴处理)，溶液正常颜色应为蓝色;如果溶液为淡绿色或黄色，加入 1/10 体积中和液 D，使颜色变回蓝色。 95℃ 处理5分钟，电泳上样
BCA 蛋白定量
40mM 碳酸钠 pH11.25
试剂盒不提供
BCA 蛋白定量试剂盒测定蛋白浓度
等电聚焦IEF/2D电泳
7M 尿素，2M 硫脲，40mM Tris，1%C7B2O或 1% ASB-14 pH10.4
试剂盒不提供
酶切实验
100mM 碳酸氢铵 pH8.5
试剂盒不提供
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