Top10电转感受态细胞

Top10电转感受态细胞

Top10 Electroporation Competent Cell  

基因型：- mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80 lacZΔM15Δ lacX74 recA1 araΔ139Δ(ara-leu)7697 galU galK rpsL (StrR) endA1 nupG

产品说明：TOP10感受态细胞是目前最常用的感受态细胞，生长速度快，转化效率高，recA1和endA1的突变有利于DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。 

Top10电转感受态细胞操作步骤：

1. 电极间距为 2.5px 的电转杯（Gene Pulser®/MicroPulser™ electroporation cuvettes）插入碎冰中，压实冰面，冰中静置 5 分钟，使电转杯充分降温。（电转杯重复使用方法：每次用完后，用大量的自来水冲洗干净去掉菌液和 DNA，用蒸馏水洗 3 遍，将其泡在 75%乙醇中 30 分钟，取出杯子，沥干液体，放在超净台中，使乙醇充分挥发，盖上盖子放干燥地方备用）。

2. 取-70℃保存的感受态细胞插入冰中，待细胞刚化冻后，加入质粒 DNA 或连接产物（洗脱或溶解质粒的溶液中离子不能太高，或用双蒸水稀释，对照 pUC19 可以用无菌水稀释到 10pg/μl），用手指拨打管底轻轻混匀，立即插入冰中，在超净台中用无菌吸头将细胞/DNA 混合物快速转移到电击杯中，避免产生气泡，确保细胞沉到杯底，盖上杯盖，空管保留待用。

3. 启动电转仪，设置电击参数: 2.0 kV，200Ω，25μF（BTX ECM 630或Bio-Rad GenePulser）。用纸巾擦掉电转杯外部的水分，将电转杯放入电转槽中进行电击。完成后，将电转杯插入冰中，加入950μl无抗生素的SOC或LB培养基，并将液体转移到原来保留的感受态空管中，37℃，150-250rpm振荡培养1小时。

4. 取 100-200μl 左右的菌液或稀释后的菌液，涂布于含相应抗生素的 LB 平板上，倒置放于 37℃培养箱培养 12-18 小时。

Top10 电转感受态细胞注意事项：

1. 电转杯必须预冷。 感受态细胞应该在冰水浴中化冻，加入 DNA 后应轻柔混匀，加入 DNA 的体积小于细胞体积的 1/10。

2. 一旦 DNA 加入到细胞中，电击操作应该立即进行。

3. DNA 应该溶解在水或 TE 中，连接酶的存在会降低转化效率，必要时需纯化连接产物。5. 电击时，电转杯中的气泡和含高浓度盐离子的 DNA 或转化产物会导致电弧现象的发生。

4. 电击完成后应该立刻加上 LB 或 SOC 等复苏培养基，每分钟延迟加入会导致 3 倍转化效率的降低。

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