超氧阴离子含量检测试剂盒
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超氧阴离子含量检测试剂盒
可见分光光度法 huayueyang0933
注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。
注意：正式测定之前选择2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
超氧阴离子含量检测试剂盒
规格：50T/48S
产品内容：
试剂名称
规格
保存条件
提取液
液体100ml×1瓶
4℃
试剂一
液体32ml×1瓶
4℃
试剂二
液体25ml×1瓶
4℃
试剂三
液体25ml×1瓶
4℃
试剂四
液体42ml×1瓶（自备）
4℃
标准品
液体1ml×1支
4℃
溶液的配制：
- 试剂四：自备氯仿；
- 标准品：10μmol/mL 亚硝酸钠。
产品说明：
生物体内超氧阴离子等活性氧具有免疫和信号传导的作用，但积累过多时会对细胞膜及生物大分子产生破坏作用，导致机体细胞和组织代谢异常，从而引起多种疾病。
超氧阴离子与盐酸羟胺反应生成 NO2 -，NO2 -在对氨基苯磺酰胺和萘乙二胺盐酸盐的作用下，生成紫红色的偶氮化合物，在 530nm 有特征吸收峰，根据 A530值可以计算样本中 O2 －含量。
超氧阴离子含量检测试剂盒
技术指标：
最低检出限：0.00124 μmol/mL
线性范围：0.0019-0.25μmol/mL
需自备的仪器和用品：
天平、水浴锅、离心机、可见分光光度计、1 mL 玻璃比色皿、研钵/匀浆器、氯仿和蒸馏水。
操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
1.植物、动物组织：称取约 0.1g 样本，加入提取液 1mL，充分研磨，12000rpm，4℃，离心 20min，取 20μL 上清测定蛋白含量，其余上清作为待测样本。
2. 血清或培养液：直接测定。
二、测定步骤
- 分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 530nm，蒸馏水调零。
2.标准溶液的制备：将标准溶液稀释为 0.125、0.0625、0.03125、0.015625、0.0078125、0.0039μmol/mL 的标准溶液，用这些标准管做标准曲线。
3.操作表
空白管
测定管
标准管
标准溶液（mL）
-
-
0.2
样本（mL）
-
0.2
-
提取液（mL）
0.5
0.3
0.3
试剂一（mL）
0.4
0.4
0.4
混匀，37℃水浴20min
试剂二（mL）
0.3
0.3
0.3
试剂三（mL）
0.3
0.3
0.3
混匀，37℃水浴20min
试剂四（mL）
0.5
0.5
0.5
混匀，8000rpm，25℃，离心 5min，小心吸取上层水相 1mL，测定 A530。计算∆A 标准=A 标准管-A 空白管，∆A 样本=A 测定管-A 空白管。（空白管只需做 1-2 次。）
二、超氧阴离子含量计算公式
- 标准曲线的绘制：以∆A 标准为 y 轴，标准溶液浓度为 x 轴，绘制标准曲线 y=kx+b。
- 超氧阴离子含量的计算：
将∆A 样本带入方程得到 x 值（μmol/mL）。
- 按照样本质量计算：
超氧阴离子含量（μmol/g 质量）=2x×V 样本÷（V 样本÷V 提取×W）=2x÷W
超氧阴离子产生速率（μmol/min/g 质量）=2x×V 样本÷（V 样本÷V 提取×W）÷T=0.1x÷W
（2）按照蛋白质浓度计算:
超氧阴离子含量（μmol/mg prot）=2x×V 样本÷（V 样本×Cpr）=2x÷Cpr
超氧阴离子产生速率（μmol/min/mg prot）=2x×V 样本÷（V 样本×Cpr）÷T=0.1x÷Cpr
- 按照血清或培养液体积计算 ：
- 超氧阴离子含量（μmol/mL）=2x
超氧阴离子产生速率（μmol/min/mL）= 2x÷T=0.1x
V 样本：参与反应样本体积，0.2mL；V 提取：提取过程中加入的提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白质浓度， mg/mL；W：样本质量，g；T：反应时间，20min。
超氧阴离子含量检测试剂盒
注意事项：
- 如果测定吸光值超过线性范围吸光值，可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。
- 样本制备好之后，立刻进行测定，请勿将样本进行长时间的低温保存，以免影响测定结果。
- 试剂四有一定的毒性，请操作时做好防护措施。
