Origami B（de3）感受态细胞

Origami B（de3）感受态细胞

Hyy78-10*100ul

菌株类型:  E.coli

培养基:  LB培养基

生长条件:  37 ℃,  有氧

基因型:  F-ompT hsdSB(rB- mB-) gal dcm lacY1 ahpC (DE3) gor522:: Tn10 trxB (KanR, TetR)

抗性:  卡那，四环素

质粒转化条件:  42 ℃热激

应用:  蛋白表达, 含二硫键蛋白表达

诱导方法:  IPTG

菌株特点

Origami B系列菌株同样具有Origami系列菌株含有的trxB/gor基因突变，但是该菌株是来源于BL21的lacZY基因突变株。所以，Origami B系列感受态细胞是集合BL21，Tuner和Origami三种细胞株的优点于一身。

在thioredoxin reductase (trxB)和glutathione reductase (gor)基因上同时含有突变，这使得该菌株能够更加高效的在细胞质内生成二硫键，有助于含二硫键蛋白的活性蛋白形成。

TrxB和Gor基因突变使得质粒能够分别具有卡那和四环素抗性，所以本菌株无法用于卡那和四环素抗性质粒的蛋白表达。

Origami B(DE3)感受态细胞来源于含有lacZY基因突变的BL21菌株，能够通过IPTG高效控制目的基因的表达。

Origami B

操作方法

1.取100ul冰上融化的BL21(DE3)感受态细胞，加入目的质粒并轻轻混匀，冰上静置25分钟。

2.42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。

3.向离心管中加入700u不含抗生素的无菌培养基(2YT或LB)，混匀后37°℃，200rpm复苏60分钟。

4.5000rpm离心一分钟收菌，留取100ul左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。

5.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。

注意事项

1.感受态细胞在冰上融化。

2.混入质粒时应轻柔操作。

3.转化高浓度的质粒可相应减少用于涂板的菌量。