链霉蛋白酶

链霉蛋白酶

FAB424

规格：250mg

保存：2-8℃保存，有效期 1 年。

链霉蛋白酶产品参数：

CAS：9036-06-0

英文名称：Pronase

别名：链丝菌蛋白酶 ；Actinase

外观（性状）：白色至浅黄色粉末

酶活/效价：Activity(Casein;pH7.5;40℃):7000u/g

链霉蛋白酶产品说明：

链霉蛋白酶 E 是一种非特异性蛋白水解酶。常用于提取 DNA 和 RAN 时蛋白消化；研究

蛋白结构；从纯化的糖蛋白中获得糖肽等。

使用说明（以下操作内容来自公开文献，仅供参考）：

消化蛋白

1. 储存液制备：溶解于去离子水，配制成 5-20mg/mL 的 PronaseE 储存液，若用于 DNA 或

RNA 分离步骤，建议将溶液 56℃加热处理 15min，之后 37℃孵育 1h，此步骤能促使酶

发生自消化，以去除 DNase 和 RNase 污染。之后将储存液分成单次用量，-20℃冻存。

2. DNA 分离：直接加入 DNA 制备体系（含有 0.5-1%SDS 以打破 DNA-蛋白相互作用），

典型 Pronase E 工作浓度范围 250-500μg/mL，于 37℃孵育 1-4h。【注意：建议工作浓度

范围在 250-2000μg/mL，依照具体情况而定】

3. 蛋白水解：溶解约 0.2μM 蛋白到 0.2mL50mM 碳酸氢铵缓冲液，pH8.0（或磷酸盐缓冲液，pH7.0），之后按照 1%（w/w）加入 PronaseE，于 37℃孵育 24h。根据情况，有可能需要添加 4%（w/w）氨肽酶 M，并于 37℃再孵育 18h。

分离小鼠原代造血干细胞

1. 雄性或雌性小鼠被麻醉，并打开腹腔。

2. 肝脏经门静脉灌注 Hanks 缓冲盐溶液（HBSS），然后灌注 PronaseE 和胶原酶。

3. 用无菌镊子轻轻取出肝脏，转移到无菌培养皿中。将肝包膜分开，轻轻摇晃肝脏以释放

细胞。

4. 将细胞悬浮于含有 PronaseE、胶原酶和 DNase 的溶液中，然后在 37℃下消化 20min。肝细胞经 50g 离心 3min，两轮分离。

5. 上清在 450g 下离心获得造血干细胞 8min，然后用 18%尼基丹（Nycodenz）溶液悬浮沉

淀，制备 12%Nycodenz、8.2%Nycodenz 和 Gey's 平衡盐溶液（GBSS）密度梯度离心。

最终，从 8.2%的 Nycodenz 层中纯化细胞，获得造血干细胞。

链霉蛋白酶

注意事项：

1. 我司生产的生化试剂如无特殊标注，基本为非无菌包装，若用于细胞实验，请提前做好预处理。

2. 一旦配成溶液，请分装保存，避免反复冻融造成的产品失效。

3. 产品信息仅供参考，如有疑问请致电 400-968-6088 咨询。

4. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗，食品及化妆品等用途。请勿存

放于普通住宅区。

5. 为了您的安全和健康，请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作