改良罗氏培养基基础

改良罗氏培养基基础

Hyyhb31-250g

用途：用于结核杆菌的分离培养。 

成分(g/ 600ml)： 

用法

称取本品49.84g,并吸取甘油12ml,加热搅拌溶解于 600ml蒸馏水中,煮沸5-10分钟,121℃高压灭菌15分钟取出。待冷至55℃左右时,以无菌操作加入无菌搅匀的全蛋液1000ml,混匀 ( 避免产生气泡 ),分装18mm×180mm试管,每管7ml,置成长斜面 ,用 85-90℃流动蒸汽 1-1.5小时后,取出,放冷,备用。 

注：培养基中含较多马铃薯淀粉，呈浑浊状。 

用法详解： 

（1）基础培养基：称取除全蛋液以外的成分加热煮沸溶解于600mL纯化水中，加热过程需不停搅拌以防止马铃薯粉凝成块或糊底，121℃灭菌15min，冷却至55℃备用； 

（2）全蛋液制备：将新鲜鸡蛋洗刷外壳后，浸于5%碳酸钠溶液中约30min，用清水冲洗后，浸泡于75%乙醇溶液中数分钟，在无菌环境中用灭菌的镊子或其他器具打破蛋壳，将蛋液倒入含玻璃珠的无菌锥形瓶中（可预先将玻璃珠放入锥形瓶中，121℃高压蒸汽灭菌15-30min），充分摇晃使蛋黄、蛋白摇散混合均匀。 

注：新鲜鸡蛋内的蛋液通常是无菌的，无须进行灭菌处理，操作过程应注意避免污染。若蛋液中可能残存蛋壳碎渣，可将打散后的全蛋液用无菌纱布进行过滤。 

（3）将1000mL全蛋液与600mL基础溶液混合充分摇匀，无菌分装于灭菌的试管中，每管5-7mL（视试管的大小调整装量），摆长斜面，用85-90℃流动蒸汽灭菌1-1.5h至斜面完全凝固，取出冷却后备用。制备好的罗氏培养基斜面应呈微绿色或黄绿色。 

注：不同于一般的培养基，此培养基中不使用琼脂，而是通过蛋液的凝固效果制成固体培养基，因此硬度较低，且分枝杆菌生长周期长，为防止培养基过分失水变干，通常使用试管制成斜面使用而不是做成平板（平板通常培养3-5天后会有明显失水变薄现象，而分枝杆菌通常需要培养数周的时间）。将蛋液与基础培养基混合时，应缓慢倒入轻轻摇匀，防止产生过多气泡。85-90℃的流动蒸汽可以保持蛋液中的维生素不被破坏，也可使用凝固器加温至85-90℃，若无流动蒸汽灭菌器和凝固器，也可使用烘箱调节至85-90℃使培养基凝固。 

改良罗氏培养基基础（GB）微生物灵敏度试验：