苯丙氨酸解氨酶（PAL）活性检测试剂盒

苯丙氨酸解氨酶（PAL）活性检测试剂盒

紫外分光光度法

规格：50T/48S HYYSB090

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系华越洋工作人员。

溶液的配制：

1、 试剂二：临用前取 1 瓶加入 4 mL 蒸馏水充分溶解待用；现配现用。4℃可以保存 2 周。

产品简介：

PAL（EC4. 3 1 5）广泛存在于各种植物和少数微生物中，是植物体内苯丙烷类代谢的关键酶，与一些重要的次生物质如木质素、异黄酮类植保素、黄酮类色素等合成密切相关，在植物正常生长发育和抵御病菌侵害过程中起重要作用。PAL 催化 L-苯丙氨酸裂解为反式肉桂酸和氨，反式肉桂酸在 290nm 处有最大吸收值，通过测定吸光值升高速率计算 PAL 活性。

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

紫外分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1mL 石英比色皿、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液进行冰浴匀浆。10000g，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

二、测定步骤

1、分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 290nm，蒸馏水调零。

2、操作表

混匀，静置 10min 后，在 290nm 处记录测定管吸光值 A1 和空白管吸光值 A2，ΔA=A1-A2。（空白管只需做 1-2次）

三、PAL 活性计算

（1）按样本蛋白浓度计算：

单位的定义：每 mg 组织蛋白在每 mL 反应体系中每分钟使 290nm 下吸光值变化 0.1 定义为一个酶活力单位。

PAL（U/mg prot）=ΔA×V 反总÷0.1÷（Cpr×V 样）÷T =17.3×ΔA ÷Cpr

（2）按样本质量计算：

单位的定义：每 g 组织在每 mL 反应体系中每分钟使 290nm 下吸光值变化 0.1 定义为一个酶活力单位。

PAL（U/g 质量）=ΔA×V 反总÷0.1÷（V 样÷V 提取×W）÷T =17.3×ΔA ÷W

V 样：加入样本体积，20µL=0.02mL；V 反总：反应总体积，1.040mL；V 提取：加入提取液的体积，1mL；T： 反应时间，30min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g。