苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性检测试剂盒
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苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性检测试剂盒
紫外分光光度法
规格:50T/48S HYYSB090
产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系华越洋工作人员。
溶液的配制:
1、 试剂二:临用前取 1 瓶加入 4 mL 蒸馏水充分溶解待用;现配现用。4℃可以保存 2 周。
产品简介:
PAL(EC4. 3 1 5)广泛存在于各种植物和少数微生物中,是植物体内苯丙烷类代谢的关键酶,与一些重要的次生物质如木质素、异黄酮类植保素、黄酮类色素等合成密切相关,在植物正常生长发育和抵御病菌侵害过程中起重要作用。PAL 催化 L-苯丙氨酸裂解为反式肉桂酸和氨,反式肉桂酸在 290nm 处有最大吸收值,通过测定吸光值升高速率计算 PAL 活性。
注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:
紫外分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1mL 石英比色皿、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤:
一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)
称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液进行冰浴匀浆。10000g,4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
二、测定步骤
1、分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 290nm,蒸馏水调零。
2、操作表
混匀,静置 10min 后,在 290nm 处记录测定管吸光值 A1 和空白管吸光值 A2,ΔA=A1-A2。(空白管只需做 1-2次)
三、PAL 活性计算
(1)按样本蛋白浓度计算:
单位的定义:每 mg 组织蛋白在每 mL 反应体系中每分钟使 290nm 下吸光值变化 0.1 定义为一个酶活力单位。
PAL(U/mg prot)=ΔA×V 反总÷0.1÷(Cpr×V 样)÷T =17.3×ΔA ÷Cpr
(2)按样本质量计算:
单位的定义:每 g 组织在每 mL 反应体系中每分钟使 290nm 下吸光值变化 0.1 定义为一个酶活力单位。
PAL(U/g 质量)=ΔA×V 反总÷0.1÷(V 样÷V 提取×W)÷T =17.3×ΔA ÷W
V 样:加入样本体积,20µL=0.02mL;V 反总:反应总体积,1.040mL;V 提取:加入提取液的体积,1mL;T: 反应时间,30min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g。