糖类转运蛋白酵母检测试剂盒

糖类转运蛋白酵母检测试剂盒

糖类转运蛋白酵母检测试剂盒储存条件: 

请按产品包装要求储存，有效期一年。 产品组分:

糖类转运蛋白酵母检测试剂盒产品说明:

1.  感受态细胞请-80℃储存，干冰运输。

2.  培养基系列的产品，请在 500mL 的蒸馏水中，加入一包干粉，搅拌混匀后，于 121℃灭菌 15min  后 使用。

产品简介:

本产品用于糖类转运蛋白酵母检测，每种培养基可制备诱导培养基平板 25 块。如需获得更多验证培 养基，可以单独订购。

试剂盒套装包含酵母转化、筛选全部试剂，均为即用型或者预混型，使用方便，不会造成资源浪费。

糖类转运蛋白酵母检测试剂盒使用说明(仅供参考）：

一、表达载体构建

1.  将目的蛋白克隆到 pDR195 载体(多克隆位点请参照图谱序列)。

2.  将重组载体转化到大肠杆菌感受态细胞中(参照 DH5a 感受态细胞使用说明书)。

3.  用含氨苄 (50-100ug/mL)的 LB 平板筛选转化产物。

4.  挑选 10-20  个克隆，PCR 并测序验证，筛选阳性克隆。

5.  用含氨苄(50-100ug/mL)的 LB 培养基摇菌，用 15%-25%甘油保存阳性菌。

6.  利用碱裂解法提取质粒，备用。

二、重组载体酵母菌转化及验证

1.  将重组载体、空载体和阳性对照载体分别转入 EBY.VW4000 感受态细胞和 SUSY7/ura3  感受态细胞（参 考说明书）。

2.  将转入 EBY.VW4000 感受态细胞的转化产物涂布 SM/-Ura with Agar (含麦芽糖)  平板，30℃培养 3-5 天，筛选阳性克隆。

3.  将转入 SUSY7/ura3  感受态细胞的转化产物涂布 SD/-Ura with Agar (含葡萄糖)  平板，30℃培养 3-5 天， 筛选阳性克隆。

4.  将 EBY.VW4000 感受态细胞阳性克隆，用无菌生理盐水重悬，调 OD600 值为 0.2 后，分别取 2.5ul 点斑 于 SM/-Ura with Agar (含麦芽糖) 、SF/-Ura with Agar (含果糖) 、SD/-Ura with Agar (含葡萄糖) ，30℃培养

3-5 天。

5.  将 SUSY7/ura3  感受态细胞阳性克隆，用无菌生理盐水重悬，调 OD600 值为 0.2 后，分别取 2.5ul 点斑 于 SD/-Ura with Agar (含葡萄糖) 、SS/-Ura with Agar (含蔗糖) ，30℃培养 3-5 天。

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