KM71毕赤酵母菌感受态细胞

KM71毕赤酵母菌感受态细胞

bcy09-10*100ul

产品规格：

基因型：

arg4 his4 aox1::ARG4

基本信息：

培养基：YPDA

菌株类别：酵母菌

培养条件：28℃，有氧，YPDA

质粒转化：化转

保存方式：30%甘油，-20℃

基本应用：用于蛋白表达

菌株简介：

KM71是毕赤酵母菌株，属于真核细胞。一般的针对原核生物的抗生素例如卡那和氨苄对酵母是无效的，因此为了防止大肠杆菌等原核生物对酵母培养菌株污染，往往会在培养基中加入一些氨苄和卡那霉素的抗生素，来抑制细菌菌的污染和生长。KM71毕赤酵母自身表型为MutS，所以KM71转化株只能产生出His+MutS菌株。毕赤酵母适宜的生长温度是28至30度，一般可以设置在30度培养，温度超过32度对蛋白的表达是有害的，并可能导致细胞的死亡。

KM71毕赤酵母是是组氨酸缺陷型（His4基因型），如果表达载体上携带有组氨酸基因，可补偿宿主菌的组氨酸缺陷，因此可以在不含组氨酸的培养基上筛选转化子。这些受体菌自发突变为组氨酸野生型的概率一般低于10^-8。

KM71毕赤酵母可以在YPD培养基中生长，或者在补充有组氨酸的minimal media中生长，但是无法在单独的minimal media培养基中生长。用30%的甘油与培养物混合保藏菌种，质粒转化的方法：电转化。

注意事项：

1、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。本产品仅可用于实验室研究，不能用于动物，人体以及作为食品添加剂等用途。

2、使用甘油菌时可不完全融解，在甘油菌表面蘸取少量涂布固体琼脂平板即可，也可完全融解后使用，但随着冻融次数的增加，菌株的活力会逐渐下降。

使用说明：

华越洋平台的各批次质粒/载体、菌株及感受态细胞发货前均经过严格的多重验证，如需获取其他详细信息请联系我们的客服QQ查询。

质粒/载体、菌株及感受态细胞等低温或超低温保存及运输产品，在操作时请客户注意以下事项：

Km71感受态细胞

KM71： 100μl×10 支/50 支 保存：-80℃（12 个月）

酵母促转化剂： 50μl /250μl 保存：-20℃（12 个月）

毕赤酵母转化液： 5ml/25ml 保存： RT（12 个月）

Km71感受态细胞

操作方法

1. 取需转化质粒 5μg，酶切，回收；

2. 取一支无菌的 1.5ml EP 管，依次加入预冷的线性质粒 1-5 μg（体

积不高于 15 μl），酵母促转化剂 5μl，100μl 冰上融化的 KM71

感受态细胞，毕赤酵母转化液 500μl，轻轻翻转混匀 6-8 次；

3. 30℃水浴 30min，每 15min 轻轻翻转混匀 6-8 次；

4. 每支加入 20μl 的二甲基亚砜；（用于提高转化效率，也可不做）

5. 42℃水浴 15min，每 7.5min 轻轻翻转混匀 6-8 次；

6. 12000rpm 瞬时离心弃上清，每支加 1ml 的 YPG Plus（或 YPG）

于 30℃复苏 1h；（用于提高转化效率，也可不做）

7. 12000rpm 瞬时离心弃上清，用 100μl 0.9% NaCl 重悬，涂板，30℃

培养 3-7d。

Km71感受态细胞

注意事项

1. 使用酵母促转化剂前，请把装有酵母促转化剂的管子在沸水中

煮沸 5min，然后立即放在冰上，用后放在-20℃储存备用。

2. 转化液低温环境下会析出，请于常温下完全溶解后使用。

3. 转化全程要无菌操作。

Km71感受态细胞

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