植物基因组DNA快速提取试剂盒
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植物基因组DNA快速提取试剂盒
plant DNAonly kit
0418-50tb
无需酚、氯仿抽提,操作速度快,高效捕获DNA
一、产品概述:
本试剂盒使用全新设计的裂解液和结合体系,不仅大大简化了DNA提取的操作流程,还进一步拓展了裂解液的样本适用范围。本试剂盒不仅适合小麦、水稻、玉米、红薯、紫薯、小麦种子等样本的DNA提取,也能从柏树、石斛、菠萝、猕猴桃、蓝莓、茶树叶、无花果叶、烟草、樱桃树、葡萄、香菲等样本中提取高质量的gDNA。
获得的gDNA大小通常介于40000-60000bp,通过Nanodrop测得的DNA浓度真实可靠,和Qubit方法检测的DNA浓度基本一致,DNA纯度高,对后续的建库或PCR等酶反应过程几乎不会有抑制,可以满足二代测序对gDNA的各种要求,也能满足部分三代测序应用对长片段gDNA的要求。
二、规格及组成:
组 分
DN33050
(50 rxn)
DN33100
(100 rxn)
溶液A
50 ml
50 ml×2
溶液B
40 ml
40 ml×2
漂洗液
50 ml
50 ml×2
DNA洗脱液
10 ml
10 ml
DNA吸附柱
50个
100个
RNase A(10mg/ml)
0.25ml
0.5ml
使用手册
1份
1份
三、注意事项:
- 使用前请检查溶液A中是否有溶质析出。溶液A在低温环境下长时间存放,可能会出现浑浊或有固体物质析出。若出现上述现象,需将溶液A在50-60℃水浴中加热至少10min,使固体析出物彻底溶解,溶液恢复澄清,充分摇匀后才能使用,否者容易引起DNA提取结果异常。
- 溶液A、B含有刺激性化合物,建议操作时戴乳胶手套、口罩及护目镜,避免沾染皮肤和衣服。若不慎沾染皮肤、眼睛时,用大量清水或生理盐水冲洗,必要时及时就医。
四、使用方法:
注意:1. 溶液A在使用前请加入β-巯基乙醇,1ml溶液A中加入20μl β-巯基乙醇,混匀后使用。加入β-巯基乙醇的溶液A室温下可保存3个月。
2. 溶液A在使用前需要加入RNase A(10mg/ml),1ml溶液A中加入5ul RNase A,混匀后使用。加入RNase A的溶液A可以在室温下保存1个月。
- 取40-100mg植物样本,根据单次提取的样本数量,参考下列三种研磨方法来破碎样本:
▲常温手工研磨:(新鲜样本,数量<10)
取适量新鲜植物组织剪成小块放入研钵,加入1ml溶液A,室温下研磨成细粉后全部转入1.5ml离心管。在研钵中长时间研磨容易导致部分基因组DNA断裂,在电泳时会呈现轻微的降解,但基本不影响后续使用,另外两种研磨方法则不会出现DNA明显断裂的情况。
▲液氮手工研磨:(手工研磨,数量<20)
在2ml离心管中加入1ml溶液A备用,取适量植物组织在液氮中研磨成细粉,转入装有溶液A的离心管,立即涡旋振荡混匀,让样本在溶液中完全分散。
▲液氮机器研磨:(使用研磨仪破碎,效率高)
取适量新鲜叶片剪成5-10mm的碎片后,转入2ml研磨管,加入直径5mm的钢珠或其它研磨珠,关闭盖子后在液氮中冷冻至少5min,然后迅速转移到组织研磨机进行破碎。破碎后的样本应呈粉末状,温度较低时呈较浅的绿色,此时立即加入1ml溶液A,立刻涡旋振荡混匀,样本和溶液A充分混匀后才能在室温下暂存,否则容易导致DNA降解。
注意:a.由于液氮冷冻后的样本温度非常低,加入溶液A后可能会出现结冰的现象,建议用涡旋振荡仪振荡至样本完全分散在溶液A中,否者样本在未接触溶液A的情况下解冻可能会引起DNA降解。
b.样本在破碎后如果不及时加入溶液A,样本粉末会迅速升温,颜色也会从浅绿色变成深绿色,此时样本中的DNA酶会逐渐恢复活性,容易发生DNA降解,影响后续DNA产量和纯度。
c.如果样本数量较多,研磨成粉的样本可以连同研磨管一起平放在干冰上暂存,如果样本较多,可以用少量干冰覆盖。如果将研磨好的样本再放回液氮中暂存,需要注意研磨管在液氮中长时间浸泡后,液氮有可能从盖子缝隙处渗入,当在室温下操作研磨管时,研磨管中的液氮会快速汽化膨胀,极易引起研磨管炸裂,若经常出现这种情况,需要使用密封性更好的研磨管。
- 当样本和溶液A完全混匀后,在60℃加热15-30min,让溶液A中的组分完全恢复溶解状态,并使样本中的RNA被充分消化。
注意:a. 加热方式可选择水浴、金属浴或恒温干燥箱,设置到对应温度即可;
b. 每1ml溶液A中需要加入5ul RNase A(10mg/ml),通常在提取前预混到溶液A中;
- 室温,12,000×g 离心5min,沉淀细胞碎片和杂质,以便分离出清澈透明的上清液。
正常现象:
a.离心结束后,植物细胞碎片应在试管底部形成较致密的沉淀,与上清液分界明显,在吸取上清时不会有固体杂质被同时吸走;
b. 上清液应清澈透明,通常呈绿色或其它颜色;上清液上部无漂浮物,偶尔有少量油状漂浮物,但不会影响吸取上清液。
- 转移700-800μl上清液到干净的2ml离心管中,避免吸入底部杂质。
- 加入等体积的溶液B,充分颠倒混匀。
正常现象:
a.加入溶液B并混匀后,液体仍然保持清澈透明,不会出现浑浊或析出絮状沉淀;
b. 如果使用涡旋振荡混匀,液体上部可能出现少量泡沫
异常现象:
混匀后出现浑浊或析出絮状沉淀,通常与样本中存在较多的多糖、蛋白质或脂类物质有关。出现这种情况时,需要适当减少最初的样本用量。
- 将上述混合物(每次最多700μl,请分多次进行离心)加入到一个DNA吸附柱中,室温,12,000×g 离心1-2min,弃掉收集管中的废液。
正常现象:
通常,液体在上述离心条件下可以全部过滤,若有未过滤的液体,再次离心2-3min或加大离心转速;
异常现象:
液体难以过滤,长时间离心后仍有液体残留,通常和样本含有特殊多糖有关。出现这种情况时,最终DNA纯度可能会偏低,重复提取时可以适当减少样本用量。
- 加入700μl漂洗液,室温12,000×g 离心1min,弃滤液。(快速漂洗步骤)
注意:大多数情况下使用快速漂洗步骤即可保证最终DNA纯度符合要求,如果样本复杂或纯度偏低,可以加入500μl漂洗液,漂洗两次,可以尽可能地提高DNA纯度。
- 将DNA吸附柱放回到空的收集管中,室温,12,000×g 离心2min。
注意:此步非常重要,否则残留的乙醇会影响DNA的使用。
- 将DNA吸附柱放入一个DNase-free 离心管中,直接在吸附膜的中间部位加50-100μl DNA洗脱液(1×TE,pH7.5),室温放置3-5min。
- 室温,12,000×g 离心2min。离心管中溶液即为DNA样品,可以立即使用或存放于-20℃待用。