抗酒石酸酸性磷酸酶染色液

抗酒石酸酸性磷酸酶染色液(TRAP Staining Kit)

规格:4x10mL/4x20mL

保存:-20℃，避光保存，有效期3个月。

产品组成:

产品说明:

酸性磷酸酶(acid phosphatase，ACP)分布极广泛，遍布各种组织，主要存在于细胞的溶酶体内，所以常作为溶酶体标志酶。溶酶体外的酸性磷酸酶存在于内质网和胞质内。各种动物中的酸性磷酸酶各有不同，酸性磷酸酶的适宜pH为4.5~5.5。存在于正常人肺泡巨噬细胞和白血病人脾脏的抗酒石酸酸性磷酸酶(Tartrate-resistnt acid phosphatase，TRAP)均在细胞滤泡中，并不是释放入血液。血液中的TRAP绝大多数来源于破骨细胞，因此可以通过测量血液中的TRAP了解破骨细胞的功能状态。

抗酒石酸酸性磷酸酶染色液以萘酚AS-BI为底物，在酸性pH下被酸性磷酸酶水解释放出磷酸和萘酚，萘酚与重氮盐偶联生成有色产物，定位于细胞质中，若细胞内的ACP有抗酒石酸的活性，则呈阳性反应。该染色液可用于新鲜血涂片、细胞涂片，亦可用于冰冻切片、石蜡切片。

自备材料:

蒸馏水、恒温箱、载玻片、光学显微镜

操作步骤:(仅供参考)

(一)样本处理:

1、细胞涂片:取新鲜全血或骨髓制备涂片。推玻片与载玻片保持30度。置于血液或细胞滴液的正前方，稍往后移与血液或细胞滴液接触使后者沿推片下缘散开，再匀速沿载玻片平面平稳向前滑动至均匀铺开为止，自然晾干。

2、贴壁培养细胞、细胞爬片:吸去培养基，*PBS清洗3-4次，沥去多余水分。取出细胞爬片。

3、 冰冻切片:从冰箱取出放置恢复室温，浸入蒸馏水清洗1-2min，沥去多余水分。

4、石蜡切片:石蜡切片脱蜡5-10min，重复一次，无水乙醇5min.90%乙醇和 70%乙醇各2min,蒸馏水浸洗 2min，沥去多余水分。

(二)染色孵育:

1、使用2-8℃预冷的TRAP固定液固定30s-3min，多数情况下30-60s即可。

2、蒸馏水洗，沥去多余水分(不宜过分干燥)。

3、(切片处理)滴加TRAP孵育液覆盖切片，置于湿盒内37C温箱孵育45-60min，蒸馏水洗。

4、(贴壁细胞)滴加TRAP孵育液覆盖细胞，置于37℃温箱孵有45-60min，蒸馏水洗，

5、复染:苏木素或甲基绿复染液染色2-3min。如选用苏木素染色液复染,染色后须自来水返蓝10min。

(三)封片观察:

1、(切片处理)蒸馏水稍洗，沥去多余水分，滴加水性封片剂封片后镜检观察。

2、(贴壁细胞)蒸馏水稍洗，可带水或1xPBS镜下观察。

染色结果:

阳性细胞胞质 紫红色

细胞核        蓝色(苏木素)或绿色(甲基绿)

常见阳性对照:

1、肺驻留巨噬细胞通常呈TRAP阳性，其冰冻或石蜡切片可作为阳性对照切片。

2、多毛细胞白血病个体外周血中多毛细胞呈TRAP阳性。

3、经酶保护固定和脱钙的骨样本中，破骨细胞和破软骨细胞呈TRAP阳性。

注意事项:

1、该染色试剂盒为酶活原位染色试剂盒，常用于破骨细胞细胞诱导培养后细胞鉴定和组织中特定细胞定位、反应底物和染料易失效，收到产品后建议第一时间根据说明书描述温度妥善保存。

2、试剂B2为偶氮染料储备液，有颗粒状悬浮物属正常现象不影响染色。如担心，预混合B1和B2可使颗粒物完全溶解，但需在2小时内使用完毕。

3、酶活易受多种因素影响导致衰减或消失。建议样本新鲜取材，使用预冷固定液在2-8℃冰箱固定，时间不宜超过24h。包埋时推荐使用低熔点蜡(52-56℃)，避免热失活。

4、不纯的二甲苯会分解黑色沉淀，宜选用AR级以上的二甲苯。

5、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。