酵母EGY48-LacZ基因胞外表达显色试剂盒

酵母EGY48-LacZ基因胞外表达显色试剂盒

储存条件：常温保存，X-Gal储存液-20℃保存，有效期一年。

产品内容：

产品成分                  规格型号

10xBU buffer(过滤除菌)       100ml

X-Gal 储存液(20mg/ml)     5ml

20%半乳糖溶液(过滤除菌 )   100ml

20%棉子糖溶液(过滤除菌)     50ml

SD/-Trp/-Ura with Agar(干粉 ) 0.5L

SC/-Trp/-Ura Broth(干粉)     8g

Agar 20g

LacZ基因胞外表达显色试剂盒

产品介绍：

本试剂盒用于EGY48酵母杂交系统中，LacZ报告基因的检测；当有互作发生，LacZ报告基因表达，生成β-半乳糖苷酶，将X-Gal切割成半乳糖和深蓝色的底物5-溴-4氯靛蓝。

筛选培养基配制：（SD/-Trp/-Ura平板）

1.请将0.5 L的SD/-Trp/-Ura with Agar干粉，加入500mL的蒸馏水中，搅拌溶解；

2.115 ℃灭菌20 min，冷却后倒板；

注意：灭菌的培养基如有剩余，可置于超净台密封保存，再次使用时微波加热溶解后倒板即可。

显色培养基配制：（SD/-Trp/-Ura/Gal/Raf/X-Gal平板）

1.组分配比，见下表；

培养基体积     组分       100mL    500mL

20%半乳糖溶液               10mL     50mL

20%棉子糖溶液                 5mL     25mL

10xBU buffer                       10mL     50mL

X-gal 储存液(20mg/ml) 0.4mL  2mL

Agar                                                2g          10g

SC/-Trp/-Ura Broth         0.8g         4g

2.根据需要按照上表称取适量SC/-Trp/-Ura Broth和Agar，加水至75ml搅拌溶解；

3.115 ℃灭菌20 min；同时预热20%半乳糖溶液、20%棉子糖溶液、10×BU buffer至55 ℃左右；

4.培养基冷却到55 ℃左右后加入预热的上述成分以及X-gal储存液，混匀倒板。

注意： 显色平板请尽快使用。3天内避光4 ℃保存的板子亦可以使用。

LacZ基因胞外表达显色试剂盒

实验方法：（以EGY48-pLacZi酵母单杂交体系为例） 

1.载体构建pLacZi-X & pB42AD-Y；

2.载体共转化EGY48酵母感受态细胞；

3.转化产物涂布SD/-Trp/-Ura with Agar 平板，28-30 ℃培养3-5天；

4.随机选择5个单菌落，Marker笔做好标记，挑取少量菌落做阳性克隆检测； 

5.挑取鉴定为阳性克隆的菌落涂布SD/-Trp/-Ura/Gal/Raf/X-Gal with Agar显色平板，28-30 ℃培养3-5天后观察显色反应。

注意：要注意避光，倒置培养，x-gal是灭菌后加到平板里的,如果太热会是x-gal失效.

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