PEG/LiAC混合液 酵母转化

PEG/LiAC混合液 酵母转化 

英文名：PEG/LiAC Transformation Solution

PEG/LiAC混合液一、使用方法:

1.5mL体系：

1. 在含有约100ng质粒的1.5mL无菌离心管中，加入5uL预变性的 Carrier DNA，50uL酵母感受态细胞，500uL LiAc/PEG3350混合液轻柔混匀。

2. 30℃水浴30 min，每10 min 混匀一次。

3. 每管加入20 uL DMSO，轻柔混匀。

4. 42℃水浴热激15 min，每5 min上下颠倒混匀一次。

5. 700 g离心5min。

6. 弃掉上清，用1 ml YPD Plus液体培养基重新悬浮，30℃摇床震荡培养30-60min。

7. 700 g 离心5min。加入1mL无菌0.9%NaCl重悬菌体。

8. 分别稀释10倍，100倍后涂布于相应的缺陷型培养基上。

9. 30℃恒温培养3-5天。

PEG/LiAC混合液 15mL体系：

1. 在含有约5-15ug质粒的15mL无菌离心管中，加入20uL预变性的 Carrier DNA，600uL酵母感受态细胞，2.5mL LiAc/PEG3350混合液轻柔混匀。

2. 30℃水浴 45 min，每10 min 混匀一次。

3. 每管加入160uL DMSO，轻柔混匀。

4. 42℃水浴热激20 min，每5 min 上下颠倒混匀一次。

5. 700 g 离心5min。

6. 弃掉上清，用3 ml YPD Plus 液体培养基重新悬浮，30℃摇床震荡培养90min。

7. 700 g 离心5min。加入15mL无菌0.9%NaCl重悬菌体。

8. 分别稀释10倍，100倍后涂布于相应的缺陷型培养基上。

9. 30℃恒温培养3-5天。