网站首页    高效BY4741 Chemically Competent Cell(免费送转化试剂)

高效BY4741 Chemically Competent Cell(免费送转化试剂)

高效BY4741 Chemically Competent Cell(免费送转化试剂)
售价:
¥ 690.00
原价: ¥790.00
关注:0
收藏
Hyyw08-1ml
数量:
  • 高效BY4741 Chemically Competent Cell(免费送转化试剂)

    Hyyw08-1ml 

    BY4741 Competent Cell:                                      100μl/            保存: -80℃3个月) 

    pYES2 (control vector, 10 ng/μl)                               10μl              保存:-80℃12个月) 

    Carrier DNA (10 μg/μl)                                             100μl              保存:-20℃12个月) 

    PEG/LiAC:                                                                    5ml              保存:    4℃12个月) 

    基因型 

    MATa his3Δ1 leu2 met15Δ ura3-52 

    产品说明 

    BY4741菌株来源于酿酒酵母原始菌株——S288C,是实验室的常用菌株,为配子MATa型,广泛应用于钠,钾离子平衡;细胞抗盐;各种金属离子的吸收;重金属毒性;各种糖类,碳源对真核生物细胞生长的影响;过氧化物,超氧化物的吸收与运输的研究中。BY4741酿酒酵母为组氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸 、尿嘧啶缺陷型菌株,可直接通过PEG/LiAcpYES2质粒转化进入BY4741细胞内。质粒pYES2的筛选标志为URA,可用SD-URA板板进行筛选。唯地生物生产的BY4741感受态细胞经特殊工艺制作,-80℃可保存三个月,pYES2质粒(5857bpAmpR)检测转化效率>103 cfu/μg DNA

    操作方法 

    1.Carrier DNA 的预处理:将Carrier DNA 插入95℃金属浴5 min或插入浮漂中95℃水浴3 min,加热后快速插入冰中。 

    2. 100 µl冰上融化的BY4741感受态细胞,依次加入预冷的目的质粒1-3 µg,预处理后的Carrier DNA 10 µlPEG/LiAc 500 µl并吸打几次混匀,30℃水浴30 min (15 min时翻转6-8次混匀) 

    3. 将感受态移到42℃水浴15 min (7.5 min时翻转6-8次混匀) 

    4. 5000 rpm离心 40 s弃上清,ddH2O 400 µl 重悬,离心 30s弃上清。 

    5. ddH2O 50 µl重悬,涂板,29℃培养48-96 h 

    注意事项 

    1. 感受态细胞最好在冰上融化。 

    2. 若使用pYES2质粒表达蛋白,需在培养基中加入2%的半乳糖(筛选培养基中不用加半乳糖;当需要目的蛋白表达时,需加入半乳糖代替葡萄糖作为碳源),以诱导目的基因的表达。 

    3. 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。 

    4. 同时转化2-3种质粒时可增加质粒的用量。 

    5. 酵母为真核生物,不易长期保存,随感受态在-80℃保存时间的延长,转化效率会不断下降,建议保存时间不超过90天。 

    6. BY4741酵母菌株对高温敏感,最适生长温度为27-30℃;高于31℃,生长速度和转化效率呈指数下降。 

    7. 酵母在缺陷培养基中生长速度比YPDA培养基慢,培养基中缺陷成分越多,生长越慢,以转化涂板为例:涂YPDA平板29℃48 h培养可见直径1 mm克隆;涂SD单缺平板29℃48-60 h培养可见直径1 mm克隆,涂SD双缺平板29℃60-80 h培养可见直径1 mm克隆,涂SD三缺或四缺平板平板29℃80-90h培养可见直径1 mm克隆。 

     

Control Render Error!ControlType:productSlideBind,StyleName:Style1,ColorName:Item0,Message:InitError, ControlType:productSlideBind Error:未将对象引用设置到对象的实例。
加入购物车