植物组织果糖(FT)检测试剂盒
-
植物组织果糖(FT)检测试剂盒(分光光度法)
hyypb74-50T
注意:正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
测定意义:SF1096
果糖是一种最为常见的己酮糖,是葡萄糖的同分异构体,以游离状态大量存在于水果的浆汁和蜂蜜中,能 与葡萄糖结合生成蔗糖。果糖是最甜的单糖,广泛应用于食品、医药、保健品生产中。
测定原理:
果糖与间苯二酚反应,生成有色物质,在 480nm 下有特征吸收峰。
植物组织果糖(FT)检测试剂盒试剂组成和配制:
提取液:液体 100ml×1 瓶,4℃保存;
试剂一:1mg/mL 标准液 10mL×1 瓶,4℃保存;
试剂二:液体 40ml×1 瓶,4℃保存;
试剂三:液体 15ml×1 瓶, 4℃保存;
试剂四:粉剂(微量)×1 瓶,常温保存。
果糖提取:
称取 0.1~0.2g 样本,常温研碎;加入 1mL 提取液,适当研磨后快速转移到有盖离心管中;置于 80℃水浴锅 中 10min(盖紧,以防止水分散失),振荡 3~5 次,冷却后,4000g,25℃离心 10min,取上清;加入少量(约 2mg)试剂四,80℃脱色 30min(盖紧,以防止水分散失);再加入 1mL 提取液,4000g,25℃离心 10min, 取上清液测定。
测定步骤:
1、 分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 480nm,蒸馏水调零。
2、 样本测定(在 1.5mL EP 管中依次加入下列试剂):
试剂(μL) 空白管 标准管 测定管
样本 100
试剂一 100
蒸馏水 100
试剂二 700 700 700
试剂三 200 200 200
混匀,95℃水浴反应 30min(盖紧,以防止水分散失),冷却后测定 480nm 处光吸收值,空白管、
标准管和 测定管分别记为 A1、A2 和 A3。
果糖含量计算:
1、果糖含量(mg/mg prot)=(C 标准管×V1)×(A3-A1)÷(A2-A1) ÷(V1×Cpr)
= (A3-A1)÷(A2-A1) ÷Cpr
此法需要自行测定蛋白浓度。
2、果糖含量 (mg/g 鲜重)=(C 标准管×V1)×(A3-A1) ÷(A2-A1) ÷(W×V1÷V2)
= 2× (A3-A1) ÷(A2-A1) ÷W
C 标准管:标准管浓度,1mg/mL; V1:加入样本体积,0.1mL;
V2:加入提取液体积,2mL; Cpr:样本 蛋白质浓度,mg/mL;
W:样本鲜重,g。
植物组织果糖(FT)检测试剂盒注意事项:
最低检测限为 100ng/g 鲜重或 1ng/mg prot