dam-/dcm-E.coli感受态细胞，dam-/dcm-感受态细胞
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dam-/dcm-E.coli感受态细胞，dam-/dcm-感受态细胞
Hyybb73-10*100ul
dam-/dcm-菌株来源于大肠杆菌K12菌株，该菌株为dam和dcm甲基化酶失活突变型菌株，常用于质粒DNA的去dam和dcm甲基化处理，消除dam和dcm甲基化对酶切的影响。核酸内切酶(endA1)基因的缺失有利于提高质粒DNA的产量和质量。甲基化酶的失活突变可能会导致质粒DNA在该菌株中会出现突变，不建议连接产物的转化实验，仅用于质粒转化。菌株还具有抗T1噬菌体感染的特点。
dam-/dcm-E.coli菌株
基因型:
ara-14 leuB6 fhuA31 lacY1tsx78 glnV44 galK2 galT22mcrA dcm-6 hisG4 rfbD1 R(zgb210::Tn10) TetsendA1 rspL136 (StrR)dam13::Tn9 (CamR) xylA-5 mtl-1 thi-1 mcrB1 hsdR2
菌株抗性:
对氯霉素、链霉素有抗性;对氨苄青霉素、卡那霉素、壮观霉素和四环素敏感。
dam-/dcm-感受态细胞感受态细胞操作方法:
1.取100ul冰上融化的dam-/dcm-感受态细胞，加入目的DNA(质粒或连接产物)并轻轻混匀，冰上静置25分钟。
2.42°C水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。
3.向离心管中加入700ul不含抗生素的无菌培养基(2YT或LB)，混匀后37℃，200rpm复苏60分钟。
4.5000rpm离心一分钟收菌，留取100u左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。
- 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。
dam-/dcm-感受态细胞注意事项:
1.感受态细胞最好在冰上融化。
2.混入质粒或连接产物时应轻柔操作。
3.转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。
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