NEB5αF´ Iq感受态细胞，NEB 5-alpha E. coli 感受态细胞

NEB5αF´ I^q感受态细胞

NEB5αF´ I^q Competent cells克隆感受态细胞

HYYBB0321-10*100ul

NEB5αF´ I^q 菌株来源于 DH5α ，具有抗T1 噬菌体感染特点。严谨的表达调控（lacI ^q）非常适用于克隆毒性基因。该菌株含 F´因子，转化效率极高，可进行蓝/白斑筛选。缺失非特异性核酸内切酶 I（endA1）活性，可用于制备高质量质粒。recA1可减少克隆 DNA 的重组反应，可用M13 噬菌体的繁殖。

NEB5αF´ I^q感受态细胞产品特点：

1. DH5α衍生菌株

2. 可高效转化 PCR、cDNA 或其它来源的非甲基化 DNA(hsdR)

3. 通过 lacI^q 严格控制表达，从而能够克隆潜在的毒性基因

4. 去除了非特异性核酸内切酶 I(endA1)的活性，以获得最高质量的质粒制备

5. 抗 T1 噬菌体(fhuA2)

6. 适用于蓝白斑筛选，通过 β-半乳糖苷酶基因的 α-互补实现

7. F' 让细胞能够被噬菌体 M13 感染产生单链 DNA

8. 减少克隆 DNA 的重组(recA1)

9. K12 菌株

基因型：F´proA+B+ lacIq Δ(lacZ)M15 zzf::Tn10 (TetR) / fhuA2Δ(argF-lacZ)U169 phoA glnV44 f80 Δ(lacZ)M15 gyrA96 recA1 endA1 thi-1 hsdR17

抗性：对氨苄青霉素、卡那霉素、壮观霉素、链霉素、氯霉素敏感，对四环素有抗性。

NEB5αF´ I^q感受态细胞应用：用于载体构建，非常适用于克隆毒性基因。

操作步骤：

1. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量100μl。

2. 待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的DNA（根据实际情况加入适量

的DNA，通常100μl感受态细胞能够被1ng超螺旋质粒DNA所饱和），用移液器轻

轻吹打混匀，冰浴30分钟。

3. 42℃热击45秒，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3分钟。
4. 每个离心管中加入450μl无菌的SOC或LB培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃

摇床，150rpm振荡培养45分钟使菌体复苏。

5. 根据实验需求，取适量已转化的感受态细胞，加到含相应抗生素的SOC或LB固体 

琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于37℃直至液体被吸收，

倒置培养，37℃培养12-16小时。

需注意：

1. 涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多，可取少量转化产物涂布平板；若转化的DNA总量较少，可取200-300μl转化产物涂布平板。若预计的克隆数较少，可通过离心（4000rpm，2分钟）后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于平板中。
2. 新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。
3. 涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。
4. EB5αF´ I^q感受态细胞