酵母DNA提取试剂盒，酵母基因组DNA 提取试剂盒

酵母基因组DNA 提取试剂盒

HYYSB08-50T

规格：50T/100T

保存：RT，有效期 1 年（RNase A、蛋白酶 K、破壁酶以附件形式发货，-20℃保存）。

产品组成：

试剂盒组成   50T     100T       保存

RNase A     100μL   100μL×2   -20℃

蛋白酶 K    1mL    1mL×2       -20℃

酵母破壁酶 1.5mL   1.5mL×2     -20℃

巯基还原剂 300μL   600μL       RT

山梨醇 Buffer 25mL   25mL×2     RT

溶液 A      15mL      30mL     RT

溶液 B      15mL      30mL     RT

漂洗液      15mL     15mL×2    RT

洗脱液      10mL      20mL     RT

吸附柱      50 个     100 个    RT

收集管      50 个     100 个    RT

注意：

1. 使用前请先在漂洗液中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶体上的标签（每瓶需单独加入

45mL 无水乙醇）。

2. 所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。

产品介绍：

本试剂盒采用可以特异性结合 DNA 的离心吸附柱和独特的缓冲液系统，提取酵母基因

组 DNA。离心吸附柱中采用的硅基质材料为本公司特有新型材料，能够高效专一吸附 DNA，

可最大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物。提取的基因组 DNA 片段大，纯度高，

质量稳定可靠。使用本试剂盒提取的基因组 DNA 可用于各种常规操作，包括酶切、PCR、文库构建、Southern 杂交等实验。

操作步骤：

1. 取酵母细胞（不超过 5×107cells），8000rpm 离心 1min，尽量吸除上清。

注意：过夜培养酵母菌液 OD 值为 2.0 左右，离心收集菌体，用 PBS 洗涤尽量去除培养基。

2. 酵母细胞壁的破除：向酵母菌体中加入 470μL 山梨醇 Buffer。充分悬浮菌体，加入 25μL酵母破壁酶和 5μL 巯基还原剂，充分混匀。30℃处理 1-2h，期间可颠倒离心管混匀数次。

3. 12000rpm 离心 1min，弃上清，收集沉淀。

4. 向沉淀中加入 300μL 溶液 A，充分悬浮沉淀，向悬浮液中加入 2μL RNase A，充分颠倒混匀，室温放置 10min。

5. 加入 220μL 溶液 B，再加入 20μL 的蛋白酶 K，充分颠倒混匀，65℃水浴消化 15-30min，消化期间可颠倒离心管混匀数次。

6. 8000rpm 离心 30s，取上清。（尽快吸出，温度降至室温后会出现白色浑浊液体）

7. 冷却至室温，加入 375μL 无水乙醇，混匀后，将液体加入吸附柱中，8000rpm 离心 1min，

弃废液，将吸附柱放入收集管中。

8. 向吸附柱中加入 600μL 漂洗液(使用前请先检查是否己加入无水乙醇)。12000rpm 离心

1min，弃废液，将吸附柱放入收集管中。

9. 向吸附柱中加入 600μL 漂洗液，12000rpm 离心 1min，弃废液，将吸附柱放入收集管中。

10. 12000rpm 离心 2min，将吸附柱敞口置于室温或 50℃温箱放置数分钟，目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，否则漂洗液中的乙醇会影响后续实验如酶切、PCR 等。

11. 将吸附柱放入一个干净的离心管中，向吸附膜中央悬空滴加 50-200μL 经 65℃水浴预热的洗脱液，室温放置 5min，12000rpm 离心 1min。

12. 离心所得脱液再加入吸附柱中，12000rpm 离心 2min，即可得到高质量的基因组 DNA。