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发根农杆菌5196感受态细胞

发根农杆菌5196感受态细胞
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    CAT:HYYPB043

    5196: 100μl×10 支

    保存条件(保质期): -80℃(12 个月)

    发根农杆菌5196感受态细胞产品说明

    5196 为发根农杆菌,具有广泛的宿主范围,本菌种来源于 5196,

    引进后视为第 0 代。用接种环接种至 3mlYEB 培养基中 28℃培养至 OD600=0.50,视为第工代,按照照 1:1 的体积比加入 50%甘油,按照每管 200ul 的量分装至 1.5mL 的 EP 管中,-80℃保存。本品为再培养分装。5196 发根农杆菌 Agrobacterium rhizogenes2 代穿刺接种方式,固体培养基上生长,诱导毛状根,具有利福平抗性。本公司生产的 5196 化学转化感受态细胞经特殊工艺制作,pCAMBIA2301 质粒(卡那霉素抗性)检测,转化效率>103 cfu/μgDNA。

    发根农杆菌5196感受态细胞操作方法

    1. 取-80℃保存的农杆菌感受态于冰上融化,每 100μl 感受态加入1-5μl(<300μg)质粒 DNA,轻弹混匀,冰浴 15min。

    2. 将上述混合物转移至液氮中急冻 5min,再 37℃热击 5min,迅速转移至冰上 2min。

    3. 加入 800μl 无抗生素的 YEB 液体培养基,28℃,220rpm 振荡培养 3-4h。

    4. 6000rpm 离心一分钟收菌,留取 100μl 左右上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素的 YEB 平板上,28℃倒置培养 2d。

    (当平板只含有 50μg/ml kan 时,28℃培养 48h 即可;平板中同时加入 kan 和 Rif 时,Rif 的用量为 10μg/ml 即可)。

    发根农杆菌5196感受态细胞注意事项

    1. 加入质粒的体积不应大于感受态体积的 1/10。

    2. 混入质粒时应轻柔操作。

    3.平板上阳性克隆密度过大时,由于营养不足,阳性克隆生长变慢,菌落变小,为了获得大的菌落,应减少质粒用量

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