发根农杆菌5196感受态细胞

发根农杆菌5196感受态细胞

CAT:HYYPB043

5196： 100μl×10 支

保存条件(保质期)： -80℃（12 个月）

发根农杆菌5196感受态细胞产品说明

5196 为发根农杆菌，具有广泛的宿主范围，本菌种来源于 5196,

引进后视为第 0 代。用接种环接种至 3mlYEB 培养基中 28℃培养至 OD600=0.50，视为第工代，按照照 1:1 的体积比加入 50%甘油，按照每管 200ul 的量分装至 1.5mL 的 EP 管中，-80℃保存。本品为再培养分装。5196 发根农杆菌 Agrobacterium rhizogenes2 代穿刺接种方式，固体培养基上生长，诱导毛状根，具有利福平抗性。本公司生产的 5196 化学转化感受态细胞经特殊工艺制作，pCAMBIA2301 质粒（卡那霉素抗性）检测，转化效率>103 cfu/μgDNA。

发根农杆菌5196感受态细胞操作方法

1. 取-80℃保存的农杆菌感受态于冰上融化，每 100μl 感受态加入1-5μl(<300μg)质粒 DNA，轻弹混匀，冰浴 15min。

2. 将上述混合物转移至液氮中急冻 5min，再 37℃热击 5min，迅速转移至冰上 2min。

3. 加入 800μl 无抗生素的 YEB 液体培养基，28℃，220rpm 振荡培养 3-4h。

4. 6000rpm 离心一分钟收菌，留取 100μl 左右上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素的 YEB 平板上，28℃倒置培养 2d。

（当平板只含有 50μg/ml kan 时，28℃培养 48h 即可；平板中同时加入 kan 和 Rif 时，Rif 的用量为 10μg/ml 即可）。

发根农杆菌5196感受态细胞注意事项

1. 加入质粒的体积不应大于感受态体积的 1/10。

2. 混入质粒时应轻柔操作。

3.平板上阳性克隆密度过大时，由于营养不足，阳性克隆生长变慢，菌落变小，为了获得大的菌落，应减少质粒用量