酵母THY.AP4感受态细胞
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酵母THY.AP4感受态细胞 菌株
CAT:HYYpb032
THY.AP4： 100μl×10 支 保存：-80℃（12 个月）
Carrier DNA (10 μg/μl) 50μl 保存：-20℃（12 个月）
PEG/LiAC: 5ml 保存： RT（12 个月）
酵母THY.AP4感受态细胞产品说明
Split ubiqutin system (mbSUS)系统是专门筛选跨膜蛋白间相互作用的检测技术，它利用分离的泛素系统直接检测天然状态下膜蛋白间的相互作用的酵母双杂系统。此系统采用 THY.AP4 酵母菌株，可直接转化质粒进行蛋白互作验证或筛库试验；此菌株的基因型为 MATa;ade2-, his3-, leu2-, trp1-,ura3-;lexA::ADE2,lexA::HIS3,lexA::lacZ。第一步通过营养缺陷型报告基因 (HIS3，ADE2)进行选择性生长筛选，进一步通过 LacZ 报告基因进行β-半乳糖分析显色的定量或半定量筛选，三个独立的报告基因，受不同启动子的调控，降 低 假 阳 性 几 率 。 此 系 统 可 使 用 质 粒 为 ： pNXgate32-3HA ，
pXNgate21-3HA，pMetYCgate。
THY.AP4 感受态细胞经特殊工艺制作，-80℃可保存 12 个月，
pGADT7 质粒检测转化效率>104cfu/μg DNA。
酵母THY.AP4感受态细胞操作方法
1. 取一支无菌的 1.5ml EP 管，依次加入预冷的目的质粒 1-3μg，Carrier DNA 5μl，100μl 冰上融化的感受态细胞，PEG/LiAc 500μl，轻轻翻转混匀 6-8 次；
2. 30℃水浴 30min，每 15min 轻轻翻转混匀 6-8 次；
3. 42℃水浴 15min，每 7.5min 轻轻翻转混匀 6-8 次；
4. 12000rpm 瞬时离心弃上清，用 100μl 0.9% NaCl 或 ddH2O 重悬，涂板，30℃培养 48-96h。
酵母THY.AP4感受态细胞注意事项
1. 使用 Carrier DNA 前，请把装有 Carrier DNA 的管子在沸水中煮
沸 5min，然后立即放在冰上，用后放在-20℃储存备用。
2. PEG 溶液在低温环境下会析出，请于常温下完全溶解后使用。
3. 转化全程要无菌操作。
4. 12000rpm 瞬时离心指离心速度升到 12000rpm 时立即停止离心。
