农杆菌R1000感受态细胞

农杆菌R1000感受态细胞

Cat:hyypb083

R1000： 100μl×10 支

保存条件(保质期)： -80℃（12 个月）

农杆菌R1000感受态细胞产品说明：

R1000 菌株为核基因中含有筛选标签——利福平抗性基因 rif，

为了便于转化操作，此菌株携带一无自身转运功能的胭脂碱型 Ti质粒 pMP90 (pTiC58DT-DNA)，此质粒含有 vir 基因。R1000 感受态特别适用于大质粒的转化：经 pCAMBIA2301 质粒检测转化效率>104cfu/μg DNA。

农杆菌R1000感受态细胞操作方法

1. 取-80℃保存的农杆菌感受态于冰上融化，每 100μl 感受态加入1-5μl(0.01-1μg)质粒 DNA，轻弹混匀，冰浴 15min；

2. 将上述混合物转移至液氮中急冻 5min，再 37℃热击 5min，迅速转移至冰上 5min；

3. 加入 800μl 无抗生素的 TY 液体培养基，28℃，220rpm 振荡培养3-4h；

4. 6000rpm 离心一分钟收菌，留取 100μl 左右上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素的 TY 固体平板上，28℃倒置培养 2-3d。

农杆菌R1000感受态细胞注意事项

1. 加入质粒的体积不应大于感受态体积的 1/10。

2. 混入质粒时应轻柔操作。

3. 平板上阳性克隆密度过大时，由于营养不足，阳性克隆生长变慢，菌落变小，为了获得大的菌落，应减少质粒用量。