K12电转 电击感受态细胞
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K12电转 电击感受态细胞
货号：huayueyang09377 10*50ul 1800元
K12电转 电击感受态细胞
产品说明书
ClearColi K12 Electro Cell 50μl/支
保存条件(保质期)： -80℃（6个月）
K12电转感受态细胞
基因型F–λ–∆endA–∆recA–frr181 msbA52 ∆gutQ ∆kdsD ∆lpxL ∆lpxM ∆pagP ∆lpxP ∆eptA
K12电转感受态细胞
产品说明ClearColi K12电击感受态细胞只能用于电击转化，不能用于热激转化。ClearColi K12菌株来源于K12 endA- recA-菌株。在K12 endA- recA-菌株中引入突变，导致ClearColi K12细胞壁外层的脂多糖（LPS）被修饰:LPS的低聚糖链被删除，同时LPS的两个酰基链也被删除，进而破坏了ClearColi K12大肠杆菌的内毒素信号通路，使得从该细胞中提取的蛋白或质粒DNA中的内毒素含量极低，提取的无内毒素质粒广泛应用于后续的哺乳动物细胞转化。ClearColi K12同时缺失核酸内切酶 (endA)和重组酶 (recA)，提高了质粒DNA的产量和质量。ClearColi K12电击感受态细胞经特殊工艺制作，pUC19质粒检测转化效率可达1×107 cfu/μg DNA。
K12电转感受态细胞
操作方法
1. 0.1 cm 电击杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净的吸水纸上5分钟，待其沥干水分，正置5分钟，待乙醇挥发干净立即插入冰中，压实冰面，电极杯顶离冰面0.5 cm以方便盖上杯盖，冰中静置5分钟充分降温。
2. 取-80℃保存的ClearColi K12电击感受态细胞插入冰中5 分钟，待其融化，加入目的DNA ，并用手拨打EP管底轻轻混匀，避免产生气泡，立即插入冰中。
A. 测定转化效率使用1 μl 10 pg/μl的对照质粒 pUC19；
B. 对于未知来源或组分不明的质粒DNA，请用乙醇沉淀DNA后加入适量TE缓冲液 (10 mM Tris HCl, pH7.5; 1 mM EDTA)重悬，DNA浓度不超过100 ng/μl，体积不超过5 μl/50 μl感受态。
3. 用200 μl枪头(用刀切除12.5px枪尖)将感受态-DNA混合物快速移到电击杯中，避免产生气泡，盖上杯盖。
4. 启动电转仪，设置参数：C=25 μF，PC=200 Ω，V=1.8 kV (此为BioRad 电转仪推荐参数，也可按所用电转仪推荐的参数操作），将电击杯快速放入电转槽中，电击完成快速插入冰中。
5. 2分钟后从冰中取出电击杯，放室温，加入1ml不含抗生素的无菌恢复培养基（室温），用1ml 枪吹吸电击杯底部数次混匀后，转移到50 ml离心管（BD Falcon 50 ml锥形离心管等），向离心管中补加恢复培养基（室温）至10 ml。37℃，225 rpm复苏60分钟。
6. 5000 rpm离心一分钟收菌，重悬后取100-200 μl涂布到含相应抗生素的LB（务必使用高盐培养基平板，不可用2YT，SOB，SOC等低盐培养基）平板上（因菌量较大，若全部涂板请选用直径375px培养皿2-5个）。将平板倒置放于37℃培养箱中培养36-48小时（培养24小时后可看到很小的克隆）。
