抗酒石酸酸性磷酸酶染色液
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抗酒石酸酸性磷酸酶染色液(TRAP Staining Kit)
规格:4x10mL/4x20mL
保存:-20℃,避光保存,有效期3个月。
抗酒石酸酸性磷酸酶染色液产品组成:
名称型号
4x10mL
4x20mL
保存条件
试剂(A):TRAP固定液
50mL
100mL
2-8℃,避光
试剂(B):TRAP孵育液
B1: AS-BI Buffer
1mL
2×1mL
-20℃,避光
B2:GBC 染色液
0.lmL
0.2mL
-20℃,避光
B3:TRAP Buffer
9mL
18mL
室温,避光
临用前,按B1:B2:B3-10:1:90混合,即为TRAP孵育液,即配即用。
试剂(C):苏木素染色液
10mL
20mL
2-8℃,避光
试剂(D):甲基绿染色液
10mL
20mL
室温,避光
抗酒石酸酸性磷酸酶染色液产品说明:
酸性磷酸酶(acid phosphatase,ACP)分布极广泛,遍布各种组织,主要存在于细胞的溶酶体内,所以常作为溶酶体标志酶。溶酶体外的酸性磷酸酶存在于内质网和胞质内。各种动物中的酸性磷酸酶各有不同,酸性磷酸酶的适宜pH为4.5~5.5。存在于正常人肺泡巨噬细胞和白血病人脾脏的抗酒石酸酸性磷酸酶(Tartrate-resistnt acid phosphatase,TRAP)均在细胞滤泡中,并不是释放入血液。血液中的TRAP绝大多数来源于破骨细胞,因此可以通过测量血液中的TRAP了解破骨细胞的功能状态。
抗酒石酸酸性磷酸酶染色液以萘酚AS-BI为底物,在酸性pH下被酸性磷酸酶水解释放出磷酸和萘酚,萘酚与重氮盐偶联生成有色产物,定位于细胞质中,若细胞内的ACP有抗酒石酸的活性,则呈阳性反应。该染色液可用于新鲜血涂片、细胞涂片,亦可用于冰冻切片、石蜡切片。
自备材料:
蒸馏水、恒温箱、载玻片、光学显微镜
抗酒石酸酸性磷酸酶染色液操作步骤:(仅供参考)
(一)样本处理:
1、细胞涂片:取新鲜全血或骨髓制备涂片。推玻片与载玻片保持30度。置于血液或细胞滴液的正前方,稍往后移与血液或细胞滴液接触使后者沿推片下缘散开,再匀速沿载玻片平面平稳向前滑动至均匀铺开为止,自然晾干。
2、贴壁培养细胞、细胞爬片:吸去培养基,*PBS清洗3-4次,沥去多余水分。取出细胞爬片。
3、 冰冻切片:从冰箱取出放置恢复室温,浸入蒸馏水清洗1-2min,沥去多余水分。
4、石蜡切片:石蜡切片脱蜡5-10min,重复一次,无水乙醇5min.90%乙醇和 70%乙醇各2min,蒸馏水浸洗 2min,沥去多余水分。
(二)染色孵育:
1、使用2-8℃预冷的TRAP固定液固定30s-3min,多数情况下30-60s即可。
2、蒸馏水洗,沥去多余水分(不宜过分干燥)。
3、(切片处理)滴加TRAP孵育液覆盖切片,置于湿盒内37C温箱孵育45-60min,蒸馏水洗。
4、(贴壁细胞)滴加TRAP孵育液覆盖细胞,置于37℃温箱孵有45-60min,蒸馏水洗,
5、复染:苏木素或甲基绿复染液染色2-3min。如选用苏木素染色液复染,染色后须自来水返蓝10min。
(三)封片观察:
1、(切片处理)蒸馏水稍洗,沥去多余水分,滴加水性封片剂封片后镜检观察。
2、(贴壁细胞)蒸馏水稍洗,可带水或1xPBS镜下观察。
抗酒石酸酸性磷酸酶染色液
染色结果:
阳性细胞胞质 紫红色
细胞核 蓝色(苏木素)或绿色(甲基绿)
常见阳性对照:
1、肺驻留巨噬细胞通常呈TRAP阳性,其冰冻或石蜡切片可作为阳性对照切片。
2、多毛细胞白血病个体外周血中多毛细胞呈TRAP阳性。
3、经酶保护固定和脱钙的骨样本中,破骨细胞和破软骨细胞呈TRAP阳性。
抗酒石酸酸性磷酸酶染色液
注意事项:
1、该染色试剂盒为酶活原位染色试剂盒,常用于破骨细胞细胞诱导培养后细胞鉴定和组织中特定细胞定位、反应底物和染料易失效,收到产品后建议第一时间根据说明书描述温度妥善保存。
2、试剂B2为偶氮染料储备液,有颗粒状悬浮物属正常现象不影响染色。如担心,预混合B1和B2可使颗粒物完全溶解,但需在2小时内使用完毕。
3、酶活易受多种因素影响导致衰减或消失。建议样本新鲜取材,使用预冷固定液在2-8℃冰箱固定,时间不宜超过24h。包埋时推荐使用低熔点蜡(52-56℃),避免热失活。
4、不纯的二甲苯会分解黑色沉淀,宜选用AR级以上的二甲苯。
5、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。