赖氨酸(Lys)含量检测试剂盒

赖氨酸(Lys)含量检测试剂盒(微量法)

注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

赖氨酸(Lys)含量检测试剂盒

测定意义:

赖氨酸是人体必需氨基酸之一，能促进人体发育、增强免疫功能，并有提高中枢神经组织功能的作用。赖氨酸为碱性必需氨基酸。由于谷物食品中的赖氨酸含量甚低，且在加工过程中易被破坏而缺乏，故称为第一限制性氨基酸。

测定原理:

蛋白质中的赖氨酸具有一个游离的c-NH2，它与茚三酮试剂反应生成蓝紫色物质，其颜色的深浅在一定范围内与赖氨酸的含量成线性关系。亮氨酸与赖氨酸的碳原子数目相同，而且仅有一个游离氨基(E-NH2),所以通常用亮氨酸配制标准液。

赖氨酸(Lys)含量检测试剂盒

试剂组成和配制:

提取液:液体100mLx1瓶，4℃保存:

试剂一:粉剂x1瓶，4℃保存:临用前加入125mL试剂三充分溶解混匀:

试剂二:液体12.5mLx1瓶，4℃保存:

试剂三:液体15mLx1瓶,4℃保存:

试剂四:60%乙醇，自备。

赖氨酸提取:

样本烘干粉碎，称取约0.01g样本，加入1mL提取液，充分匀浆,80℃水浴提取20min,冷却后10000g离心10min,取上清待测。

赖氨酸(Lys)含量检测试剂盒

测定步骤:

1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至530nm，蒸馏水调零。

2、工作液的配制:取10mL试剂一与10mL试剂二混合摇匀，取上清备用。用不完的试剂4℃保存。

3、在有盖EP管中加入下列试剂:

混匀，取200μL至微量石英比色皿或96孔板中，于530nm波长处记录吸光值A.△A=A测定管-A空白管。空白管只要做一管。

赖氨酸含量计算:

a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下

标准条件下测定回归方程为y=0.0062x-0.0212;x为赖氨酸含量(μg/mL),y为吸光值。

1.按照蛋白浓度计算

赖氨酸含量(μg/mg prot)=[(△A+0.0212)÷0.0062×V1]+(Cpr×V1)×1.1515

=185.73×(△A+0.0212)÷Cpr

2.按照样本质量计算

赖氨酸含量(ug/g干重)=[(△A +0.0212)÷0.0062×V1]÷(W×V1÷V2)×1.1515

=185.73×(△A+0.0212)÷W

V1:加入反应体系中样本体积，0.1mL; V2:加入提取液体积,1mL;

Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL: W:样本质量，g:

1.1515,校正系数。

b.用96孔板测定的计算公式如下

标准条件下测定回归方程为y=0.0031x-0.0212；x为赖氨酸含量(μug/mL),y为吸光值。

1.按照蛋白浓度计算

赖氨酸含量(ug/mg prot)=[(△A+0.0212)÷0.0031×V1]÷(Cpr×V1)×1.1515

=371.45×(△A+0.0212)÷Cpr

2.按照样本质量计算

赖氨酸含量(μg/g 干重)=[(△A +0.0212)÷0.0031×V1]÷(W×V1÷V2)×1.1515

=371.45×(△A+0.0212)÷W

V1:加入反应体系中样本体积，0.1mL: V2:加入提取液体积，1mL:

Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL: W:样本质量，g:

1.1515，校正系数。

赖氨酸(Lys)含量检测试剂盒