农杆菌GV3101（pSoup）感受态细胞

农杆菌GV3101（pSoup）感受态细胞 化转

GV3101(pSoup)： 100μl×10 支

保存条件(保质期)： -80℃（6 个月）

农杆菌GV3101（pSoup）感受态细胞 产品说明

GV3101(pSoup)菌株为 C58 型背景，核基因中含有筛选标签——利福平抗性基因 rif，为了便于转化操作，此菌株携带一无自身转运功能的胭脂碱型Ti 质粒 pMP90 (pTiC58DT-DNA)，此质粒含有 vir 基因 (vir 基因是 T-DNA 插入植物基因组必需的元件，pMP90 (pTiC58DT-DNA)质粒自身的 T-DNA 转移功 能 被 破 坏 ， 但 可 以 帮 助 转 入 的 双 元 载 体 T-DNA 顺 利 转 移 ) 。 pMP90(pTiC58DT-DNA)型 Ti 质粒含有筛选标签：gent，赋予 GV3101 菌株庆大霉素抗性；在 GV3101 菌株中转入 help 质粒：pSoup 即为 GV3101(pSoup)菌株，可帮助 pGreen，62SK，pGs2 系列质粒在农杆菌中复制，同时赋予该菌株四环素（tet）抗性。适用于拟南芥、烟草、玉米、土豆等植物的转基因操作。本公司生产的 GV3101(pSoup)化学转化感受态细胞经特殊工艺制作，pGs2(卡那霉素抗性)质粒检测转化效率>103 cfu/μg DNA

农杆菌GV3101（pSoup）感受态细胞 操作方法

1. 取-80℃保存的农杆菌感受态于冰上融化，每 100μl 感受态加入 0.01-0.1μg质粒 DNA，轻弹混匀，冰浴 15min。

2. 将上述混合物转移至液氮中急冻 5min，再 37℃热击 5min，迅速转移至冰上 5min。

3. 加入 800μl 无抗生素的低盐 LB 液体培养基，28℃，220rpm 振荡培养 3-4h。

4. 6000rpm 离心一分钟收菌，留取 100μl 左右上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素的低盐 LB 平板上，28℃倒置培养 2-3d。（当平板只含有 50μg/ml kan 时，28℃培养 48h 即可；平板中同时加入50μg/ml kan，20μg/ml rif 时，需 28℃培养 60h；如果使用的平板含有 50μg/mlrif 则需要 28℃培养 72-90h）。

农杆菌GV3101（pSoup）感受态细胞 注意事项

1. 加入质粒的体积不应大于感受态体积的 1/10。

2. GV3101(pSoup)感受态具有四环素抗性，但在转入目标质粒筛选阳性克隆时，只需加入目标质粒抗性的抗生素，不加四环素。

3. 培养基加利福平是防止杂菌生长；根据所用菌株抗性加入链霉素或庆大霉素可防止 Ti 质粒丢失，但链霉素不利于农杆菌的转基因操作，培养农杆菌时不考虑链霉素或庆大霉素，Ti 质粒丢失的概率极低 (可以忽略)。

4. 利福平浓度不应高于 25μg/ml，过高不利于农杆菌生长，且会降低感受态的转化效率。

农杆菌GV3101（pSoup）感受态细胞 ，农杆菌GV3101（pSoup）感受态细胞