毕赤酵母GS115 感受态细胞

毕赤酵母GS115 感受态细胞  化转

GS115： 100μl×10 支/50 支 保存：-80℃（12 个月）

酵母促转化剂： 50μl /250μl 保存：-20℃（12 个月）

毕赤酵母转化液： 5ml/25ml 保存： RT（12 个月）

毕赤酵母GS115 感受态细胞

产品说明

GS115 是毕赤酵母菌株，属于真核细胞。一般的针对原核生

物的抗生素例如卡那和氨苄对酵母是无效的，因此为了防止大肠杆菌等原核生物对酵母培养菌株污染，往往会在培养基中加入一些氨苄和卡那霉素的抗生素，来抑制细菌菌的污染和生长。GS115 毕赤酵母自身表型为 Mut+，但是 GS115 转化株既能够产生出 Mut+菌株，也能够产生出 Muts 菌株。目的蛋白在这两种转化株的表达水平可能是不同的，并且具有不可预测性，所以只有通过实验才能得到最好的酵母表达方案。毕赤酵母适宜的生长温度是 28~30℃，温度超过 32℃对蛋白的表达是有害的，并可能导致细胞的死亡。GS115毕赤酵母是是组氨酸缺陷型（His4 基因型），如果表达载体上携带有组氨酸基因，可补偿宿主菌的组氨酸缺陷，因此可以在不含组氨酸的培养基上筛选转化子。这些受体菌自发突变为组氨酸野生型的概率一般低于 10-8。GS115 毕赤酵母可以在 YPD 培养基中生长，或者在补充有组氨酸的 minimal media 中生长，但是无法在单独的 minimal media 培养基中生长。

毕赤酵母GS115 感受态细胞操作方法

1. 取需转化质粒 5μg，酶切，回收；

2. 取一支无菌的 1.5ml EP 管，依次加入预冷的线性质粒 1-5 μg（体积不高于 15μl），酵母促转化剂 5μl，100μl 冰上融化的 GS115感受态细胞，毕赤酵母转化液500μl，轻轻翻转混匀 6-8 次；

3. 30℃水浴 30min，每 15min 轻轻翻转混匀 6-8 次；

4. 每支加入 20μl 的二甲基亚砜；（用于提高转化效率，也可不做）

5. 42℃水浴 15min，每 7.5min 轻轻翻转混匀 6-8 次；

6. 12000rpm 瞬时离心弃上清，每支加 1ml 的 YPD Plus（华越洋有售）于 30℃复苏 1h；（用于提高转化效率，也可不做）

7. 12000rpm 瞬时离心弃上清，用 100μl 0.9% NaCl 重悬，涂板MD培养基(华越洋的MD培养基筛选阳性转化子），30℃培养 3-7d。

毕赤酵母GS115 感受态细胞注意事项

1. 使用酵母促转化剂前，请把装有酵母促转化剂的管子在沸水中

煮沸 5min，然后立即放在冰上，用后放在-20℃储存备用。

2. 转化液低温环境下会析出，请于常温下完全溶解后使用。

3. 转化全程要无菌操作。

4. 12000rpm 瞬时离心指离心速度升到 12000rpm 时立即停止离心。

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